Uji Aktivitas Lipase dan Biosurfaktan dari Bakteri Keratinolitik

Abstract

The aim of this study was to determine lipase and biosurfactant activity of keratinolytic bacteria. Lipase activity assay was carried out qualitatively using the sensitive plate assay method using rhodamine-B olive oil agar (ROA plate assay) and quantitatively using copper soap colorimetry method using cuppric acetatepyridine reagent (CAPR) as a dye and olive oil as a substrate. Characterization of lipase was performed in pHs (4; 5; 6; 7 and 8) and temperature (30; 35; 40; 45 and 50 oC). Assay of biosurfactant production activity was conducted using oil displacement test method to measured oil displacement area (ODA) and emulsification activity assay to measured emulsification index (EI24). The four keratinolytic bacteria in this study had lipase and biosurfactant activity. Two potential bacteria were obtained Aeromonas media LU04 and Enterobacter tabaci PK09 which had higher lipase and biosurfactant activity than isolates LU02 and LU01. Both bacteria of A. media LU04 and E. tabaci PK09 had more orange fluorescence around the colony with specific lipase of 0.443 and 0.346 U/mg, respectively. The lipase activity of both bacteria was optimum at pH 7 and temperature at 40 oC. Biosurfactant production activity in both bacteria was obtained with each ODA value of 38 and 15 mm and EI24 values of 20 and 15%. The maximum of lipase and biosurfactant activity was obtained on the fourth and eighth days for A. media LU04 and E. tabaci PK09, respectively. Increased biosurfactant activity is in line with lipase activity because biosurfactant is produced by the presence of lipase activity, and in the lipase activity is needed of biosurfactant activity.

Tujuan dilakukannya penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas lipase dan biosurfaktan dari bakteri keratinolitik. Pengujian aktivitas lipase dilakukan secara kualitatif menggunakan metode sensitive plate assay rhodamine-B olive oil agar (ROA plate assay) dan secara kuantitatif menggunakan metode copper soap colorimetry dengan cuppric acetate-pyridine reagent (CAPR) sebagai pewarna dan minyak zaitun sebagai substrat. Karakterisasi lipase dilakukan dengan menguji aktivitas lipase pada kisaran pH (4; 5; 6; 7 dan 8) dan suhu (30; 35; 40; 45 dan 50 oC). Pengujian aktivitas produksi biosurfaktan menggunakan metode uji oil displacement untuk mengukur nilai oil displacement area (ODA) dan uji aktivitas emulsifikasi untuk mengukur indeks emulsifikasi (IE24). Keempat bakteri keratinolitik yang diuji pada penelitian ini memiliki aktivitas lipase dan biosurfaktan. Dua bakteri potensial diperoleh yaitu Aeromonas media LU04 dan Enterobacter tabaci PK09 yang memiliki aktivitas lipase dan biosurfaktan lebih tinggi dibandingkan isolat LU02 dan LU01. Kedua bakteri A. media LU04 dan E. tabaci PK09 memiliki pendaran berwarna oranye lebih banyak disekitar koloni dengan nilai spesifik lipase masing-masing sebesar 0,443 dan 0,346 U/mg. Aktivitas lipase kedua bakteri berada optimum pada pH 7 dan suhu 40 oC. Aktivitas produksi biosurfaktan pada kedua bakteri diperoleh dengan masing-masing nilai ODA sebesar 38 dan 15 mm dan nilai IE24 sebesar 20 dan 15%. Nilai maksimum aktivitas lipase dan biosurfaktan diperoleh pada hari keempat dan kedelapan untuk masing-masing bakteri A. media LU04 dan E. tabaci PK09. Peningkatan aktivitas biosurfaktan sejalan dengan aktivitas lipase karena biosurfaktan diproduksi oleh adanya aktivitas lipase, dan dalam aktivitas lipase dibutuhkan adanya aktivitas biosurfaktan.